噬菌体培养测序|噬菌体文库构建|噬菌体平台公司 -凯发k8网页登录
- 片段插入率＞90%
- 库容大于10^10
- 快速交付
服务特色
金开瑞噬菌体平台现推出抗体库构建服务、抗体片段库构建服务、双特异性抗体定制服务及抗体人源化服务，为您提供专业的一站式服务，满足您的实际需求！
服务介绍
噬菌体展示技术通过将外源肽段和噬菌体衣壳蛋白融合展示于噬菌体表面，进行高通量筛选及富集，并对所需功能的克隆进行定性分析，该技术展示对象涵盖抗体、抗体 片段、肽段、cdna等。在对抗体库的研究中，噬菌体展示技术可对人和其他动物的b细胞抗体库进行体外建库筛选，避开了免疫和细胞融合等步骤从而缩短实验周期并增加了稳定性，该技术还具有筛选容量大、可发酵大量主产、方法简单等优点。
服务优势
- 固相和液相噬菌体展示文库筛选经验丰富，可自动化进行噬菌体展示高通量筛选，实现快速交付；
- 天然抗体文库库容可高达10^10及以上，免疫抗体文库库容可达至少10^7及以上；
- 引入先进的亲和力检测技术，深入的生物信息学分析，选择最佳的人源框架区序列快速且高通量筛选高亲和力及高产量的人源化抗体；
- 大于90%以上的片段插入率。
最终交付
- 建库交付：
- 测序报告；
- 建库过程的检测数据（抗体基因扩增，库插入效率检测，库多样性检测，其标准为：抗体基因插入比例 ：90%以上；库容：10^8；有效抗体基因比例：70-80%；插入长度一般是750bp左右 ， 因为每个抗体的cdr区长度不同，所以插入长度的指标一般不做具体要求）；
- tg1抗体库（或者噬菌体展示抗体库 ）20-30ml，按照1ml/管 进行分装。
- 筛选交付：
- 经过3-4轮筛选，挑取单克隆进行elisa p检测，以高于空白及阴性对照2.2倍为阳性克隆的判断标准，交付至少5个克隆测序结果。
服务说明
| 序号 | 库类别 | 种属 | 天然库还是免疫库 | 抗体基因来源 | 标签 | 库容 | 周期 |
| 1 | scfv | 人 | 天然库 | 外周血 | e-tag/his-tag/ha | ≥9次方 | 8-10周 |
| 2 | 鼠 | ||||||
| 3 | 兔 | ||||||
| 4 | scfv | 人 | 免疫库 | 外周血/脾脏 | ≥7次方 | 18-24周 | |
| 5 | 鼠 | ||||||
| 6 | 兔 | ||||||
| 4 | fab | 人 | 天然库 | 外周血 | ≥9次方 | 8-10周 | |
| 5 | 鼠 | ||||||
| 6 | 兔 | ||||||
| 4 | fab | 人 | 免疫库 | 外周血/脾脏 | ≥7次方 | 18-24周 | |
| 5 | 鼠 | ||||||
| 6 | 兔 | ||||||
| 7 | sdab | 羊驼 | 天然库 | 外周血 | ≥9次方 | 8-10周 | |
| 8 | 免疫库 | 18-24周 | |||||
| 9 | 半合成库 | 8-12周 | |||||
| 10 | 7肽 随机库 | \ | 随机肽库 | \ | ≥9次方 | \ | |
| 11 | 12肽 随机库 | \ | 随机肽库 | \ | ≥9次方 | \ |
案例展示
常见问题与解析 (q&a)
1）tg1宿主菌：用于被噬菌体感染后扩增（特征：抗体序列和噬菌体的p3蛋白通过tag偶联，tg1菌的特点是对tag既可以识别为终止子，即只表达出抗体，分泌上清中，也可识别为tag编码的aa，翻译成q（谷氨酰胺），此时抗体序列即和噬菌体p3相连，展示在噬菌体表面，所以此时上清是一个混合物，通常用于筛选）； 2）抗体库：有两种形式，一是tg1菌（内含展示抗体的phagemid），下一步如果要做筛选需添加辅助噬菌体，使phagemid包装到噬菌体上，使之成为含有抗体序列的噬菌体库，用于筛选；二是已包装完成的噬菌体库（含有展示抗体的phagemid），下一步做筛选，其实二就是已经做完一的步骤； 3）辅助噬菌体：构建好的小鼠天然抗体库通常以噬菌粒的形式保存在宿主菌中，在淘选过程开始前，应当先拯救文库，使其成为噬菌体展示的抗体库辅助噬菌体，过程即添加辅助噬菌体，起作用是编码产生另一些噬菌体所不能产生的重要蛋白质，使另一些噬菌体得以生长和繁殖； 4）hb2151表达菌（特征：对atg只能识别为终止子，是抗体单独分泌到上清中，主要用于表达！） 备注：tg1和hb2151的差别是，tg1是终止密码抑制菌株，终止密码可以通读，hb2151就不行了，也就是说tg1可以表达scfv抗体-p3蛋白，而hb2151可以只表达出scfv抗体。
对于噬菌体抗体库做筛选的话： 1.优势：抗体库技术不仅可以模拟动物免疫系统产生抗体的过程，还具有许多独特的优点，令杂交瘤技术难以相比。抗体库技术无需免疫，从理论上讲，108-1010的库容就可能包容所有的抗体。利用抗原即可直接从非免疫动物抗体库中筛选出特异性抗体，然后将阳性克隆重组到质粒表达载体，通过大肠杆菌或者真核细胞直接表达有功能的抗体分子，周期较短，通常16-20周即可完成一个天然抗体库的构建及筛选工作； 2.劣势：scfv抗体亲和力相对传统杂交瘤技术获取的全抗体偏低或者相当，但如果不影响内源样本或者二三级结构的识别，该劣势点即可弥补！ 传统杂交瘤技术做筛选的话： 1.优势：通过多次免疫使动物体内产生的抗体达到亲和力成熟后，取动物的b淋巴细胞进行融合，经过多次亚克隆筛选获得可稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株，并能持续培养获得抗体，该种方法获得的抗体相对噬菌体抗体库筛选的单链抗体来说属于天然全抗体，抗体亲和力更高，可应用的实验类型也更为广泛，其次批间差较小； 2.劣势：周期较长，一般从抗原制备开始到获得单链抗体，需要至少5个月的时间。
我们合作的噬菌体库筛选项目一般是这么个流程，客户拿到上清，会初步做下结合活性和部分功能验证，可用的测序拿到序列，然后批量构建，批量表达，筛选出高表达高亲和力的，再进一步测试是否有比如成药靶点潜力等实验。我们表达了这么多抗体项目经验来看，还是要用哺乳系统。因为大肠系统很难实现上清表达，大多是包涵体，而抗体要想有功能，必须还是上清表达，借助哺乳系统，加上可分泌到上清中的信号肽，而抗体效价跟抗体纯度跟浓度肯定是分不开的
噬菌体的滴度很高，从之前的阳性测试就能看得出来，即便再稀释个10倍甚至100倍，都还会有2.0的读值，有少量非特异性吸附是很正常的，不然淘选阶段都结合上的噬菌体为什么elisa筛选后，只有少量的克隆才能被挑选出来，测试交叉这种，是需要在合适浓度的抗原抗体反应体系下进行的，尤其是间接elisa，不管是抗原还是抗体，浓度过高，少量的非特异性结合更常见。
相关资源
1、噬菌体展示技术的步骤
噬菌体展示技术的步骤主要包括以下几个阶段：
①构建噬菌体展示文库：
● 获取目标蛋白或多肽的编码序列。
● 选择适合的噬菌体展示系统，常用的包括m13噬菌体、t4噬菌体等。
● 将目标序列与噬菌体基因组中的外被蛋白基因（coat protein gene）连接，构建融合基因。
● 将融合基因插入噬菌体基因组中，构建噬菌体展示文库。
②噬菌体展示：
● 将构建好的噬菌体展示文库感染到宿主细菌中，如大肠杆菌。
● 细菌表达噬菌体展示文库中的融合基因，使噬菌体颗粒表达在细菌表面。
● 通过细菌培养和噬菌体产出，获得大量的噬菌体颗粒。
③筛选和选择：
● 准备目标分子，如蛋白质、抗体、小分子化合物等。
● 将噬菌体展示文库中的噬菌体与目标分子进行特异性结合，一般采用固相吸附、免疫筛选等方法。
● 对结合复合物进行洗涤，以去除非特异性结合的噬菌体。
● 通过洗脱或者其他方法，获得与目标分子结合能力较强的噬菌体。
④鉴定和分析：
● 从筛选出的噬菌体中提取基因，一般采用pcr扩增的方法。
● 对提取的基因进行测序，获取融合基因的序列信息。
● 分析测序数据，确定与目标分子结合的蛋白或多肽序列。
以上是噬菌体展示技术的基本步骤。在具体应用中，可以根据需要进行优化和改进，例如引入多肽标签用于检测和纯化、引入多重筛选步骤以提高筛选效果等。噬菌体展示技术的关键是构建高质量的展示文库和有效的筛选方法，以获得具有特定功能和结合性质的目标分子。
2、噬菌体展示技术的应用
噬菌体展示技术在生物医学研究、生物制药和生物技术领域有广泛的应用。以下是一些噬菌体展示技术的主要应用领域：
● 抗体工程：噬菌体展示技术可用于抗体工程，用于筛选和优化具有高亲和力和特异性的抗体。通过构建噬菌体库，可以在大规模的抗体变异体中筛选出与特定抗原结合能力强的抗体。
● 肽和蛋白质工程：噬菌体展示技术可以用于筛选和改进具有特定功能的肽和蛋白质。通过展示肽或蛋白质变体库，可以选择具有特定性质的分子，如酶活性、结合活性、药物亲和性等。
● 药物发现和开发：噬菌体展示技术可用于药物发现和开发。通过在噬菌体上展示小分子化合物库，可以筛选出与特定靶点结合的潜在药物候选物。
● 蛋白质相互作用研究：噬菌体展示技术可用于研究蛋白质之间的相互作用。通过将两个蛋白质或多肽的编码序列连接到噬菌体基因组中，可以在噬菌体颗粒表面同时展示这两个蛋白质或多肽，并研究它们之间的结合性质和相互作用机制。
● 疫苗设计：噬菌体展示技术可用于疫苗设计。通过展示病原体的抗原蛋白质或多肽片段，可以诱导免疫反应，产生特定的抗体和免疫应答，从而用于疫苗的开发和疾病预防。
● 诊断工具和生物传感器：噬菌体展示技术可用于开发诊断工具和生物传感器。通过展示特定的诊断标志物或靶分子，可以用于检测和监测疾病标志物、细菌、病毒等。
3、噬菌体展示技术中涉及到的一些专属名词及释义
● 噬菌体（phage）：一种寄生于细菌的病毒，可以利用其基因组中的外被蛋白基因来展示目标蛋白或多肽。
● 噬菌体展示（phage display）：将目标蛋白或多肽的编码序列与噬菌体基因组中的外被蛋白基因连接，并通过噬菌体颗粒表面展示目标分子的技术。
● 外被蛋白基因（coat protein gene）：噬菌体基因组中编码构成噬菌体颗粒外被蛋白的基因。
● 噬菌体展示文库（phage display library）：包含大量噬菌体颗粒的集合体，每个颗粒表面展示着不同的蛋白或多肽变体。
● 多肽标签（peptide tag）：在目标蛋白或多肽的编码序列中引入的短小肽段，用于检测、纯化或定位目标蛋白或多肽。
● 固相吸附（solid-phase adsorption）：一种常用的筛选方法，通过将固相材料（如酶联免疫吸附板）与目标分子结合，使噬菌体与目标分子特异性结合。
