t5核酸外切酶（t5 exonuclease） -凯发k8网页登录

t5 核酸外切酶沿 5’→3方向降解 dna。既能从 5’末端起始消化，也能从线性或环状双链 dna 的切刻或缺口处起始消化，但不能降解超螺旋双链 dna。t5 核酸外切酶还具有单链 dna 核酸内切酶活性。降解碱裂解质粒提取方法中产生的变性 dna，提高 dna 克隆效率。

产品特点
无核酸外切酶和核酸内切酶残留；
稳定性好；
加入edta至终浓度为至少11mm或含有sds的dna loading buffer (sds的最终浓度为0.08%)可使t5 exonuclease失活；
 

产品应用
t5 exonuclease常被用于gibson组装(gibson assembly)

t5核酸外切酶，是一种按照5'→3'方向降解双链或单链dna的核酸外切酶。既能从单链或双链dna 5'末端起始消化，也可以从线性或环状双链dna的缺口(gap)或缺刻(nick)处起始消化。t5 exonuclease无法降解超螺旋双链dna，并且其降解单链dna的活性可以通过将反应缓冲液中的mg2 降低到低于1mm而进行抑制。基于以上特性，t5 exonuclease常被用于gibson组装(gibson assembly)。

gibson组装：在恒温条件下，有效连接带有多个重叠序列片段的技术，其基本原理可以概括为三步：(1) t5核酸外切酶从dna片段的5'末端开始消化，产生互补的单链3'末端(overhangs)，促使互补的末端退火；(2) dna聚合酶填补退火片段的缺口(gaps)；(3) dna连接酶将组装后的切刻(nicks)处进行连接，最后得到一个完整的双链dna。

t5核酸外切酶失活或抑制：加入edta至终浓度为至少11mm或含有sds的dna loading buffer (sds的最终浓度为0.08%)可使t5 exonuclease失活。

1.参考下表在冰浴中设置反应体系：

注：t5 exonuclease应最后加入反应体系中，并且加入前须注意混匀反应体系；使用时宜存放在冰盒内或冰浴上。

2.适当混匀反应体系，低速离心以沉淀液体至管底。 
3.反应条件：37ºc孵育10-30min。
4.终止反应：反应结束后立即冰浴并加入edta至终浓度为11mm以终止反应。

注意事项
1、t5 exonuclease是一种对于dna底物有选择性的核酸外切酶，其对不同的dna底物显示出不同的反应活性。因此，消化特定的底物时，须注意适当控制好酶量和反应时间；
2、t5 exonuclease的最佳反应温度为37℃，但是在50℃也具有一定活性，因此可用于gibson组装。
3、t5 exonuclease在普通pcr buffer中也具有活性。