实验原理
免疫共沉淀(co-immunoprecipitation)是利用抗原与抗体之间的专一性作用为基础，从而用于研究蛋白质与蛋白质之间相互作用的一种方法。抗体与裂解液中相应的蛋白结合后，再与proteina/g偶联的sepharose或magneticbeads孵育，通过离心或者借助磁力架获得proteina/g磁珠-抗体-目的蛋白复合物，在高温及还原剂的作用下，抗原与抗体解离，收集上清，上清中包括抗体、目的蛋白和少量的杂蛋白，再通过western blot或质谱（ms）鉴定蛋白质。其原理图如下：
实验流程
试剂盒组分
常见问题
q1：通过coip后wb验证发现，没有想要的目的条带？
a：多方面原因造成:
1）有可能是样品被蛋白酶降解，对应的策略是需要添加蛋白酶抑制剂，所有操作保持4℃以下冰上操作且避免反复冻融。
2）有可能是抗体浓度太低导致条带较浅，则需要调整ip或wb抗体浓度，必要时设立浓度梯度，摸索最佳浓度。
3）抗体亲和力太低，选用适合于ip或者wb的抗体。
4）有的ip抗体未与磁珠结合，这种情况需选用适合ip的磁珠。
5）若tag未暴露在融合蛋白构象的表明，则需改变tag融合表达部位。
6）裂解液盐碱度太高，需用低盐碱度的裂解液。
7）抗体选择不当，更换抗体。
q2：通过coip后wb验证发现，虽然可见目的条带，但是背景很高：
a：多方面原因造成:
1）由非特异带白结合导致背景高，若要避色主特异性带白结合，则需要在无血清溶液中裂解细胞，且在免疫沉淀前用protein(a/g)磁珠预洗免疫沉淀后增加漂洗次数和盐碱度(高盐或去垢剂)。
2）实验仪器或试剂被污染，使用洁净的仪器及实际。
3）转移膜上的目特异吸附导致背景高，实验操作过程中载手套，使用镊子来取，不要接触膜转移面。
4）制备样品中可能有不完全溶释的大的蛋白复合体，则在制备样品后进行知暂超声处理(3次，每次5秒钟 )，然后离心，取上清后进行后续试验。
5）洗涤不彻底，则需要多次洗涤，并设新增加洗涤液中的nacl和去垢剂浓度。
6）可能有非特异性蛋白吸附于珠子上，则须进行preclearing以排非特异性吸付。
7）抗体本身待异性不好可能导数者景高，则须选择合适的抗体，可以考虑单抗。
8）使用了过多的细胞或组织进行裂解导致背景高，则须减少样本量，推荐100-500ug细胞裂解物。
9）蛋白降解也可能出现高背景的情况，尽量使用新鲜制备的样品。
相关产品
⇒ 银染试剂盒(silver stain kit) ⇒ co-ip试剂盒（植物）
⇒ dna pull-down试剂盒（动物） ⇒ dna pull-down试剂盒（植物）
相关技术服务
► 双荧光素酶报告系统 ► 酵母双杂交 ► emsa ► rna pull-down
► rip-qpcr ► dna pull-down ► chip-qpcr ► 酵母单杂交
