噬菌体展示技术通过将外源肽段和噬菌体衣壳蛋白融合展示于噬菌体表面,进行高通量筛选及富集,并对所需功能的克隆进行定性分析,该技术展示对象涵盖抗体、抗体片段、肽段、cdna等。在对抗体库的研究中,噬菌体展示技术可对人和其他动物的b细胞抗体库进行体外建库筛选,避开了免疫和细胞融合等步骤从而缩短实验周期并增加了稳定性,该技术还具有筛选容量大、可发酵大量生产、方法简单等优点。
购买neb 的 3 种随机肽库包括 7 肽库(ph.d.-7)、12 肽库(ph.d.-12)和含有二硫键的环 7 肽库(ph.d.-c7c)。所有肽库的容量超过 20 亿个克隆。上述 3 种肽库表达的随机肽均在噬菌体次要包膜蛋白 piii 的 n 端,故每一个病毒粒子可以表达 5 个拷贝。
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靶向肽药物治疗:
癌细胞进行随机肽库筛选,得到高亲和力的小肽,应用于药物转载靶向运输,减少机体副作用。
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模拟表位筛选:
抗体进行随机肽库筛选,得到的多肽,可以推断出抗体可能识别的抗原表位。可用于未知病毒及疾病的靶蛋白序列推测。
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重金属回收:
噬菌体多肽库筛选出可以和金属结合的肽段,用于重金属的回收利用及重金属污染水质土壤的处理。
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筛选蛋白激动剂和抑制剂:
噬菌体肽库筛选出与某蛋白特异性结合的多肽,通过相关实验验证其激活或者抑制活性的作用。
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化学新型材料研发:
通过噬菌体随机肽库筛选与金属化合物结合的肽作为新型的粘合剂,以用于发现和产生新的复合材料。
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细胞表面配受体筛选:
细胞表面蛋白多为跨膜蛋白,膜蛋白难以表达,或者表达的蛋白难以保持正确的构象。用重组蛋白筛选的抗体,可能不识别细胞表达的抗原。可以用细胞直接从抗体库中筛选出膜蛋白的抗体。
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药用阻断剂:
病原体通过与某一个受体蛋白结合后进入体内,通过筛选与受体蛋白结合位点相似的表位,在病原体入侵之前进行预防,阻断病原体与受体蛋白的结合。
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中和解毒剂:
常规致毒动物的血清可进行毒液治疗,但是产量及治疗效果有限。通过噬菌体纳米抗体库筛选出与血清功能类似的中和抗体,利用其组织穿透力和低免疫原性,可提供更好的治疗效果。
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双特异性抗体:
通过噬菌体纳米抗体库,利用其分子量小,穿透力强的特性,筛选出即可以靶向目的细胞,也可以装载药物的纳米抗体,用于靶向药物治疗。
序号 | 库类别 | 种属 | 天然库还是免疫库 | 抗体基因来源 | 标签(可选) | 库容 | 周期 | 交付标准 |
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1 | scfv | 人、鼠、兔 | 天然库 | 外周血 | e-tag/his -tag/ha | ≧9次方 | 8-10周 | ①测序报告;②建库过程的检测数据(抗体基因扩增,库插入效率检测,库多样性检测,其标准为:抗体基因插入比例:90%以上;库容:10^8;有效抗体基因比例:70-80%;插入长度一般是750bp左右,因为每个抗体的cdr区长度不同,所以插入长度的指标一般不做具体要求);③ tg1抗体库(或者噬菌体展示抗体库) 2030 ml,按照 1ml/管进行分装; |
2 | scfv | 人、鼠、兔 | 免疫库 | 外周血/脾脏 | ≧7次方 | 18-24周 | ||
3 | fab | 人、鼠、兔 | 天然库 | 外周血 | ≧9次方 | 8-10周 | ||
4 | fab | 人、鼠、兔 | 免疫库 | 外周血/脾脏 | ≧7次方 | 18-24周 | ||
5 | sdab | 羊驼 | 天然库 | 外周血 | ≧9次方 | 8-10周 | ||
6 | sdab | 羊驼 | 免疫库 | 外周血 | ≧9次方 | 18-24周 | ||
7 | sdab | 羊驼 | 半合成库 | 外周血 | ≧9次方 | 8-12周 | ||
8 | 个性化库构建 | 根据客户需求 | 根据客户需求 | 根据客户需求 | 根据客户需求 | 根据客户需求 | 具体评估 |
筛选原类型 | 筛选原标准 | 备注 | 交付标准 |
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单一组分的:重组蛋白、纯 化 的 天 然 蛋 白、肽段 | 纯度90%及以上 | 若需要验证其他实验,比如 wb 或 facs 等,价格另议 | 经过3-4轮筛选,挑取单克隆进行elisap检测,以高于空 白及阴性对照2.2倍为阳性克 隆的判断标准,交付至少5个克隆测序结果 |
混合组分的,比如血清纯化的抗体 、 组织、细菌、病毒、细胞等 | 组织裂解液蛋白抽提之后,总蛋白含量不低于5mg/ml | 经过3-4轮筛选,挑取单克隆进行elisa检测,以高于空 白及阴性对照2.2倍为阳性克隆的判断标准,交付至少5个克隆测序结果 |
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来源于人cd63(哺乳表达系统)重组蛋白,筛选人源化的vhh噬菌体抗体库,获得13条不同的抗体序列,选取其中8个抗体序列,采用哺乳系统进行vhh-fc抗体的重组表达量较高,重组抗体对筛选源进行elisa检测,效价结果与筛选结果相差不大。
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编号 | 1f8 | 1g4 | 2a6 | 2h4 | 3b7 | 4f16 | 4h10 | 4a6 |
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抗体原液 | 3.1056 | 2.9210 | 2.7578 | 2.9423 | 2.575 | 2.7465 | 3.0024 | 2.6425 |
1:100 | 2.8245 | 2.5632 | 2.1875 | 2.3023 | 2.3273 | 2.5459 | 2.9412 | 2.1218 |
1:1000 | 2.4210 | 2.1421 | 1.5251 | 1.7012 | 1.7587 | 1.8424 | 2.4102 | 1.6548 |
1:5000 | 1.6520 | 1.3215 | 0.9213 | 1.0214 | 1.2324 | 1.1251 | 1.6248 | 0.8149 |
1:10000 | 0.7212 | 0.5621 | 0.5002 | 0.612 | 0.4521 | 0.5101 | 0.8426 | 0.4258 |
fc空载体表达对照 | 0.0310 | 0.1023 | 0.2154 | 0.1389 | 0.1027 | 0.0124 | 0.1124 | 0.0296 |