如果对抗体的特异性要求高,用量较大或需要长期使用一致的抗体,制备的抗体应用要求多(wb/ip/if/icc等),可以选择制备单克隆抗体。 若对抗体的特异性要求不高,需要做沉淀和凝集反应的检测性实验或者只需做elisa检测,可以选择制备多克隆抗体。 另外多抗需要免疫原的量大,如果免疫原制备困难,建议制备单抗。多抗相比较单抗仍然有制备时间短、首次制备成本低的特点,在一些情况下也是一种选择。 在相同条件下,使用多抗可以提高检测的灵敏度,对于丰度偏低的蛋白也更容易检出。
单抗制备整个流程大致包括:(1)抗原制备;(2)动物免疫;(3)细胞融合;(4)杂交瘤筛选及单克隆化;(5)抗体纯化。
分子量大于10kda,b纯度>85%,浓度不低于0.5mg/ml,最好1–5mg/ml之间的可溶性蛋白。不应含有叠氮钠、咪唑、尿素或其它有毒有害刺激性大的物质。甘油含量应低于20%。质量大于3mg 必须提供如下信息:a sds-page检测图,清楚标示样品上样量,marker上样量,和各自的浓度。 最好提供如下信息:c wb检测图
1)必须提供如下信息:a 分子式;b 获取方式 c 浓度和纯度; d hplc鉴定结果。 (2)最好提供如下信息:c wb检测图。
(1)(1)多肽是否偶联载体,偶联载体多肽:总量大于6-7mg,纯度大于80%;浓度大于0.5mg/ml;未偶联载体多肽总量大于10mg,纯度大于90%;浓度大于0.5mg/ml (2)必须提供如下信息:a sds-page检测图,清楚标示样品上样量,marker上样量,和各自的浓度。
必须供如下信息:a 是否对人致病;b 灭活方式;c 灭活前后sds page检测图,清楚标示样品上样量,marker上样量,和各自的浓度。 注:不接收未灭活的致病菌,不接收致病菌。
必须供如下信息:a 是否对人致病;b 灭活方式;c 灭活前后sds page检测图,清楚标示样品上样量,marker上样量,和各自的浓度。 注:不接收未灭活的致病病毒,不接收致病病毒。
所有项目均提供: (1)项目结题报告,包括以下内容:小鼠血清效价,杂交瘤的构建(融合率、阳性率)、杂交瘤的克隆化、杂交瘤培养上清液的抗体特异性检测,以及杂交瘤诱生腹水的elisa 效价检测。 (2)提供2-3 株杂交瘤细胞株和10ml腹水纯化的抗体,100ul腹水原液,1ml细胞上清; (3)提供的单抗腹水或者杂交瘤细胞株的上清经elisa 检测与客户提供的抗原样品有特异性结合; (4)所提供的单抗腹水或者杂交瘤细胞株的上清经western blot检测结果呈阳性。 需要另付费提供:
动物脾脏有上百万种不同的b淋巴细胞系,具有不同基因不同的b淋巴细胞合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时,抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的b细胞。被激活的b细胞分裂增殖形成效应b细胞(浆细胞)和记忆b细胞,大量的浆细胞克隆合成和分泌大量的抗体分子分布到血液、体液中。如果能选出一个制造一种专一抗体的浆细胞进行培养,就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群,即单克隆。单克隆细胞将合成针对一种抗原决定簇的抗体,称为单克隆抗体。 单抗的制备流程大致分为4步:①抗原制备,②动物免疫,③细胞融合,杂交瘤单克隆化,筛选及扩增,④抗体纯化。
不管是杂交瘤获得的可变区序列还是噬菌体获得的可变区序列,都是b淋巴细胞存在的抗体序列,可以认为是天然的,只是重链和轻链的组合可能不一样,不一定来源于同一个b淋巴细胞。
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