1）tg1宿主菌：用于被噬菌体感染后扩增（特征：抗体序列和噬菌体的p3蛋白通过tag偶联，tg1菌的特点是对tag既可以识别为终止子，即只表达出抗体，分泌上清中，也可识别为tag编码的aa，翻译成q（谷氨酰胺），此时抗体序列即和噬菌体p3相连，展示在噬菌体表面，所以此时上清是一个混合物，通常用于筛选）； 2）抗体库：有两种形式，一是tg1菌（内含展示抗体的phagemid），下一步如果要做筛选需添加辅助噬菌体，使phagemid包装到噬菌体上，使之成为含有抗体序列的噬菌体库，用于筛选；二是已包装完成的噬菌体库（含有展示抗体的phagemid），下一步做筛选，其实二就是已经做完一的步骤； 3）辅助噬菌体：构建好的小鼠天然抗体库通常以噬菌粒的形式保存在宿主菌中，在淘选过程开始前，应当先拯救文库，使其成为噬菌体展示的抗体库辅助噬菌体，过程即添加辅助噬菌体，起作用是编码产生另一些噬菌体所不能产生的重要蛋白质，使另一些噬菌体得以生长和繁殖； 4）hb2151表达菌（特征：对atg只能识别为终止子，是抗体单独分泌到上清中，主要用于表达！） 备注：tg1和hb2151的差别是，tg1是终止密码抑制菌株，终止密码可以通读，hb2151就不行了，也就是说tg1可以表达scfv抗体-p3蛋白，而hb2151可以只表达出scfv抗体。
对于噬菌体抗体库做筛选的话： 1.优势：抗体库技术不仅可以模拟动物免疫系统产生抗体的过程，还具有许多独特的优点，令杂交瘤技术难以相比。抗体库技术无需免疫，从理论上讲，108-1010的库容就可能包容所有的抗体。利用抗原即可直接从非免疫动物抗体库中筛选出特异性抗体，然后将阳性克隆重组到质粒表达载体，通过大肠杆菌或者真核细胞直接表达有功能的抗体分子，周期较短，通常16-20周即可完成一个天然抗体库的构建及筛选工作； 2.劣势：scfv抗体亲和力相对传统杂交瘤技术获取的全抗体偏低或者相当，但如果不影响内源样本或者二三级结构的识别，该劣势点即可弥补！ 传统杂交瘤技术做筛选的话： 1.优势：通过多次免疫使动物体内产生的抗体达到亲和力成熟后，取动物的b淋巴细胞进行融合，经过多次亚克隆筛选获得可稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株，并能持续培养获得抗体，该种方法获得的抗体相对噬菌体抗体库筛选的单链抗体来说属于天然全抗体，抗体亲和力更高，可应用的实验类型也更为广泛，其次批间差较小； 2.劣势：周期较长，一般从抗原制备开始到获得单链抗体，需要至少5个月的时间。
我们合作的噬菌体库筛选项目一般是这么个流程，客户拿到上清，会初步做下结合活性和部分功能验证，可用的测序拿到序列，然后批量构建，批量表达，筛选出高表达高亲和力的，再进一步测试是否有比如成药靶点潜力等实验。我们表达了这么多抗体项目经验来看，还是要用哺乳系统。因为大肠系统很难实现上清表达，大多是包涵体，而抗体要想有功能，必须还是上清表达，借助哺乳系统，加上可分泌到上清中的信号肽，而抗体效价跟抗体纯度跟浓度肯定是分不开的
噬菌体的滴度很高，从之前的阳性测试就能看得出来，即便再稀释个10倍甚至100倍，都还会有2.0的读值，有少量非特异性吸附是很正常的，不然淘选阶段都结合上的噬菌体为什么elisa筛选后，只有少量的克隆才能被挑选出来，测试交叉这种，是需要在合适浓度的抗原抗体反应体系下进行的，尤其是间接elisa，不管是抗原还是抗体，浓度过高，少量的非特异性结合更常见。
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