gst pull-凯发k8网页登录

信息来源:金开瑞 作者:genecreate 发布时间:2023-12-06 17:11:58

    gst(glutathione s-transferase)下拉法是一种常用的蛋白质亲和纯化技术,用于纯化具有gst标签的蛋白质。下面是gst下拉法的原理及方法概述:

1、原理

    gst下拉法利用gst标签与谷胱甘肽(glutathione)结合的亲和性,将含有gst标签的蛋白质特异地吸附在谷胱甘肽-sepharose或类似的固相载体上。通过洗脱非特异结合的其他蛋白质,得到纯化的目标蛋白质。

2、方法概述

    制备gst标签融合蛋白:将目标蛋白质与gst融合,使目标蛋白质含有gst标签。

    细胞裂解:利用适当的细胞裂解方法(如超声波、高压均质等)破碎细胞,释放内含gst标签融合蛋白的细胞内容物。

    亲和纯化:将细胞裂解液与谷胱甘肽-sepharose或类似的亲和树脂混合,使gst标签融合蛋白与树脂发生特异性结合。

    洗脱:通过洗涤步骤去除非特异结合的其他蛋白质,保留目标蛋白质的亲和结合。

    蛋白质回收:采用适当的洗脱缓冲液(如还原谷胱甘肽溶液)将目标蛋白质从亲和树脂上洗脱下来。

    纯化评价:利用sds-page、western blot等方法检测纯化后的目标蛋白质。

    具体的gst下拉法操作细节可能因实验目的和研究对象的不同而有所差异。在进行实验前,建议参考相关文献并遵循相关实验室的操作规程。




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