外泌体转染mirna的实验方法-凯发k8网页登录
信息来源:金开瑞 作者:genecreate 发布时间:2023-10-11 16:54:02
外泌体转染mirna的实验方法可以根据具体的研究目的和条件而有所不同,以下是一些常见的实验步骤供参考:
外泌体的纯化:通常可以采用超速离心、密度梯度离心等方法,来从细胞培养上清液或生物液(如血浆)中纯化外泌体。在纯化过程中,需要注意不要受到细胞碎片等杂质的干扰。
确定外泌体蛋白的浓度:使用比色法或bca等方法,测定纯化的外泌体中的蛋白浓度。根据需要可以通过蛋白印迹等方法验证外泌体的来源和纯度。
构建mirna载体:将mirna编码序列克隆到mirna表达载体中,例如plenti-u6-mir-xxx-3p/5p-puro或psicor-mcherry-mir-xxx-3p/5p等。
转染外泌体:将mirna载体转染到产生外泌体的细胞中,例如hek293t或u87-mg细胞中。转染完成后,收集细胞培养上清液,然后通过超速离心、密度梯度离心等方法,纯化含有mirna的外泌体。
外泌体转染:将纯化的外泌体加入到目标细胞中,通常需要注意控制外泌体的浓度和处理时间,以达到最佳的转染效果。可以通过荧光素酶报告基因等方法验证mirna启动子的转录活性,或通过实时荧光定量pcr等方法评估mirna的表达水平和靶基因的表达情况。
在进行外泌体转染mirna的实验前,需要加强对外泌体的了解,并严格控制研究质量和实验过程中可能出现的不确定性。此外,鉴于该实验涉及许多专业技术和数据分析。
上一条:酵母双杂感受态细胞的制备
下一条:emsa超迁移自由探针消失的原因
![凯发k8网页登录](/uploads/image/simages/logo.png)
- 扫码登入
- 账户密码登入
- 短信验证登入
须知
首次微信扫码用户步骤:
1.微信扫码。
2.本页面完善手机验证。
找回密码
已有账号?
注册帐号
已有账号?
-
扫码领资料
扫码领资料
电话:027-87960366
- 文献奖励申请