transwell细胞迁移实验步骤-凯发k8网页登录
信息来源:金开瑞 作者:genecreate 发布时间:2023-09-27 15:09:55
transwell细胞迁移实验是常用的细胞迁移和侵袭能力检测方法之一,以下是一般的操作步骤:
准备transwell孔板:将12孔或24孔transwell孔板放在无菌96孔板中,每孔加入200-300μl预先添加适当浓度血清的基础培养液或其他所需实验条件的培养液,并在低孔板中加入同样体积的基础培养液作为底部液。
细胞处理:将需要进行迁移实验的细胞提取出来并计数,以确定初始浓度。可根据实验设计需要,在培养过程中添加抑制剂,诱导剂等物质及试验组和对照组。
细胞接种:将适量的处理好的细胞加入transwell孔板上面的上腔中,注意不要超过孔底。可以通过洒液法,利用多道技术或自动移液机等方式加入细胞。
恒温孵育:孵育时间和温度随实验设计和需要而变化,一般情况下为37℃,5% co2, 16-72小时左右,视细胞类型而定。
固定细胞:基于实验目的方案选择合适的方法灭活和固定细胞,如甲醛、冰乙酸、丙酮等。
细胞染色:在带有crystal violet或抗体的溶液中染色并显色,在显微镜下观察,记录和照相。
细胞计数:根据每个孔底的染色密度进行细胞计数,消除干扰因素得到实验组样品和对照组样品的作图分析和报告。
实验操作前应充分准备,并选用高质量的实验试剂和仪器设备,严格控制实验条件,如时间、温度、试剂浓度等,以获得准确和可重复的实验结果。
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