外泌体wb鉴定|外泌体分离提取|外泌体试剂盒价格 -凯发k8网页登录
- 外泌体提取
- 外泌体鉴定
- 植物外泌体
- 动物外泌体
服务特色
外泌体提取和鉴定技术广泛应用于生物医药研究领域，包括了解细胞间通讯机制、研究疾病的发病机制、发现生物标志物、开发新型药物传递系统等。金开瑞提供从外泌体提取、鉴定，到功能验证的一站式服务。在外泌体提取，尤其是植物外泌体提取方面具有丰富经验。
服务介绍
外泌体提取和鉴定是一种实验技术，用于从生物样本中分离和分析外泌体。外泌体是细胞释放的小型囊泡，携带有脂质、蛋白质、核酸等生物分子。提取过程通过特定处理步骤将外泌体从样本中纯化出来，而鉴定过程则利用多种方法对外泌体进行分析，包括形态学观察和分子分析。外泌体提取和鉴定技术被广泛应用于生物医药研究，有助于了解细胞间通讯、研究疾病机制、发现生物标志物等。
外泌体（exosome），特指直径在40-100nm的盘状囊泡。其主要来源于细胞内内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。现已证实可以分泌外泌体的细胞有：肥大细胞、淋巴细胞、树突状细胞、肿瘤细胞、间充质干细胞等。
外泌体在免疫中抗原呈递、肿瘤的生长与迁移、组织损伤的修复等生理病理上起着重要的作用。同时，不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功能，可作为疾病诊断的生物标志物。
服务优势
- 先进技术：应用先进的提取和鉴定技术，确保高效、可靠的服务。
- 高质量数据：专业团队进行准确分析和解读，提供可靠的结果和报告。
- 个性化方案：根据客户需求提供定制化凯发k8网页登录的解决方案，紧密配合研究项目。
- 保密与可靠性：严格保护客户样品和数据信息，提供安全可靠的服务。
- 快速交付：高效的实验流程和操作经验，及时交付结果，满足时间要求。
服务流程
客户提供
血清、血浆、唾液、尿液等体液、细胞上清、植物样品等其它特殊样品
样品送样要求：
1、血清：使用无添加剂采血管采血；使用rnase-free的离心管；送样量＞4ml
2、血浆：不可使用肝素抗凝；溶血样本不建议使用，及时处理，避免剧烈晃动；送样量＞4ml
3、细胞上清：使用无外泌体血清培养；离心去除细胞碎片；防支原体等微生物污染；送样量＞20ml
4、植物样本：植物组织
最终交付
- 外泌体粒径、浓度检测报告
- wb检测结果
- q-pcr相关检测结果
- 电镜图片
- ngs测序结题报告
- 蛋白组学结题报告
- 特殊服务：外泌体整体方案设计探讨
- （根据具体项目确定交付）
服务说明
案例展示
常见问题与解析 (q&a)
在外泌体当中，含有大量疾病相关的多种rna分子，如mirna，mrna，lncrna等，而外泌体中rna含量的高低主要是通过荧光定量pcr来鉴定。但是如果出现检测内参不齐，就会限制rna分子定量检测的标准，而引入外参在外泌体rna定量分析中是另外一种可选的有效手段。外参法主要是在检测过程中，加入到待检测样本中的外源性物质，加入的外源性物质可以很精确的反映不同样本在检测过程中出现的偏差。所以若是出现内参不齐时，可以考虑引入外参。
elisa可以用来检测样本中特定蛋白或细胞因子含量，同样也是可以用来检测外泌体中一些标志性蛋白。elisa试剂盒检测的样本是有多种类型的，如血清、血浆、尿液、细胞培养上清或组织匀浆液等，对于不同的样本，前期的处理方式也是不同的， 对于elisa实验的来说，实验样本的处理非常关键。在处理过程中，使提取溶剂与容器内的样品充分接触以深入到样本组织内部，提取待测成分。在净化过程中加入的溶剂，可能会降低待测组分的浓度或者不适宜直接分析，需要去除全部有机溶剂。同时要对尽量去除待测样本中的杂质，以防干扰实验结果。
正常情况下，血清中外泌体的含量还是很高的。一般常规实验血清纯化外泌体，建议可以先对外泌体进行鉴定，通过电镜检测观察一下外泌体的是否具有杯状结构，然后通过nta检测一下粒径大小和粒径浓度，确定没问题进行再进行wb验证。 wb实验失败的一些原因：（1）抗体染色不充分，可以增加抗体浓度，延长孵育时间进行改善。（2）检查酶是否失活，可以直接将酶和底物进行混合，如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物。（3）可以增加阳性对照，如果阳性对照有结果，但标本没有，则可能是标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低。可以增加标本上样量解决靶蛋白含量低的原因。（4）检查抗体是否失效，看抗体是否过期，工作液尽量现配现用。
目前外泌体蛋白提取的方法相对较少，有的可以通过购买试剂盒来购买提取外泌体蛋白。在一篇专利中提到如何提取血清中的外泌体，专利申请号：cn201810287204.6 专利名称：提取外泌体及外泌体蛋白的方法 提取外泌体方法步骤：所得含有外泌体的材料(即洗涤后的沉淀)置于冰上，向其中加入18μl4g/100ml的sds水溶液，然后超声(超声条件在100w下进行)裂解20分钟，得到超声产物；将超声产物在16000g下离心5分钟，收集全部上清液；向上清液中加入82μl 8m尿素水溶液和二硫苏糖醇，得到裂解液，该裂解液中二硫苏糖醇的浓度为20mmol/l；将该裂解液在37℃孵育4小时，得到裂解产物；将裂解产物转移至fasp管中，用8m尿素水溶液洗涤(fasp管是一种按分子量截留的管，洗涤过程都是通过离心完成，离心条件为14000g离心10分钟，离心以后，绝大部分溶液和小分子物质被离心至下层接收管子里，外泌体被截留在上层的fasp管中)2次；然后加入碘乙酰胺(终浓度50mmol/l)，室温下避光反应1小时，用50mm碳酸氢铵水溶液洗涤3次，加入1μg胰蛋白酶，37℃酶切12小时，将所得溶液45℃热干，用0.1％(v/v)甲酸水溶液定容，得到外泌体蛋白提取液，将外泌体蛋白提取液上样进行lc-ms/ms分析，上样量为1μg。所得含有外泌体的材料(即洗涤后的沉淀)置于冰上，向其中加入18μl4g/100ml的sds水溶液，然后超声(超声条件在100w下进行)裂解20分钟，得到超声产物；将超声产物在16000g下离心5分钟，收集全部上清液；向上清液中加入82μl 8m尿素水溶液和二硫苏糖醇，得到裂解液，该裂解液中二硫苏糖醇的浓度为20mmol/l；将该裂解液在37℃孵育4小时，得到裂解产物；将裂解产物转移至fasp管中，用8m尿素水溶液洗涤(fasp管是一种按分子量截留的管，洗涤过程都是通过离心完成，离心条件为14000g离心10分钟，离心以后，绝大部分溶液和小分子物质被离心至下层接收管子里，外泌体被截留在上层的fasp管中)2次；然后加入碘乙酰胺(终浓度50mmol/l)，室温下避光反应1小时，用50mm碳酸氢铵水溶液洗涤3次，加入1μg胰蛋白酶，37℃酶切12小时，将所得溶液45℃热干，用0.1％(v/v)甲酸水溶液定容，得到外泌体蛋白提取液，将外泌体蛋白提取液上样进行lc-ms/ms分析，上样量为1μg。
相关资源
1、一些常见的外泌体提取方法的优劣对比
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提取方法 |
概念 |
优势 |
劣势 |
| 超速离心法 | 利用离心力将外泌体从生物样本中分离出来 |
相对简单、常用；可适用于大多数样本类型； 适用于大规模提取 |
需要多次离心步骤； 易受到细胞碎片和蛋白质污染 |
| 超滤法 | 通过滤膜筛选外泌体，根据大小分离 | 快速、高效；适用于大样本体积 | 大分子物质与外泌体的分离效果可能不理想 |
| 密度梯度离心法 | 利用密度梯度离心介质，根据密度差异纯化外泌体 | 提取纯度较高；适用于小样本量 |
操作复杂，耗时较长； 对离心速度和时间要求较高 |
| 免疫沉淀法 | 利用特定抗体与外泌体表面标记分子的相互作用进行提取 | 特异性高，可用于纯化特定标记的外泌体 |
需要有特异性抗体； 提取纯度可能受到抗体效能的影响 |
| 多步骤联合方法 |
结合多个提取方法的优点， 利用不同步骤提高提取纯度和产量 |
提取效果综合优于单一方法；适用于复杂样本 |
操作复杂，耗时较长； 可能会引入额外的污染或失去部分样本 |
2、外泌体研究的常见思路
● 外泌体生物学特性研究：了解外泌体的起源、形成机制、分泌调控以及其在细胞间的传递方式和动态变化。这个思路可以通过细胞培养、分离和纯化外泌体、使用显微镜观察外泌体形态学特征、分析外泌体的成分和分子组成等来探索。
● 外泌体功能研究：研究外泌体在细胞间的信息传递、信号调控、基因转移、免疫调节等方面的功能。可以通过外泌体与接受者细胞的共培养实验、外泌体摄取实验、功能分析等方法来揭示外泌体的功能机制。
● 外泌体在疾病中的作用研究：探索外泌体在不同疾病发生、发展和转移过程中的作用机制，如癌症、心血管疾病、神经退行性疾病等。可以通过临床样本分析、动物模型研究、体外实验等方法来研究外泌体在疾病中的作用和潜在应用。
● 外泌体作为生物标志物的研究：寻找外泌体中特定分子、蛋白质、核酸等作为生物标志物，用于疾病的诊断、预后评估和治疗监测等临床应用。可以通过分子标记和成分分析、临床样本分析等方法来研究外泌体作为生物标志物的潜力。
● 外泌体工程研究：利用基因工程和纳米技术等方法，改变外泌体的产生、组成和功能，以实现药物递送、基因治疗和再生医学等方面的应用。可以通过外泌体工程和功能研究相结合的方法来探索外泌体在医学领域的应用前景。
这些思路可以相互交叉和结合，根据具体的研究目的和问题，选择合适的研究方法和实验设计，从不同角度深入研究外泌体的生物学特性和功能，以及其在疾病诊断和治疗中的潜在应用。
3、外泌体研究中一些常用的数据库和资源库
● exocarta：exocarta是一个广泛被引用的外泌体数据库，收集了来自不同物种和细胞类型的外泌体相关数据，包括外泌体蛋白质、mirna和脂质等成分的信息。
● evpedia：evpedia是一个综合性的外泌体数据库，提供了外泌体相关的蛋白质、mirna、脂质等分子组成信息，并提供了相应的注释、实验方法和参考文献。
● vesiclepedia：vesiclepedia是一个外泌体和细胞外囊泡相关的数据库，提供了来自多个物种的外泌体和囊泡的蛋白质组学数据，帮助研究者进行外泌体的研究和分析。
● mirbase：mirbase是一个全面收集整理mirna序列和注释信息的数据库，研究者可以在该数据库中查询和下载与外泌体相关的mirna信息。
● geo（gene expression omnibus）：geo是一个公共基因表达数据的数据库，研究者可以在其中找到与外泌体相关的转录组数据集，用于进一步分析和挖掘外泌体的功能和调控网络。
● tcga（the cancer genome atlas）：tcga是一个癌症基因组学数据的资源库，其中包含了大量癌症患者的临床数据、转录组数据和蛋白质组数据等，研究者可以在其中寻找与外泌体相关的癌症数据。
● pubmed：pubmed是一个生物医学文献数据库，其中包含了丰富的外泌体研究相关的科学论文和综述文章，研究者可以在其中查找最新的外泌体研究进展和相关文献。
