emsa凝胶迁移实验|wb检测|核酸蛋白互作试剂盒 -凯发k8网页登录
- 核蛋白提取
- 验证型emsa
- 竞争型emsa
- 超迁移emsa
- rna/dna结合蛋白
服务特色
金开瑞提供emsa检测技术服务，帮助您检测dna结合蛋白、rna结合蛋白、特定的蛋白质。
服务介绍
凝胶迁移或电泳迁移率检测（electrophoretic mobility shift assay，emsa）是一种检测蛋白质和dna序列相互结合的技术，可用于定性和定量分析。目前已用于研究dna结合蛋白和特定的dna序列的相互作用，是转录因子研究的经典方法。
验证型emsa
⽤于验证探针是否含有可与蛋⽩质结合的位点。将结合位点突变，以突变探针为对照，野⽣型探针出现迁移条带，⽽突变探针未出现迁移条带，则说明该探针含有可与蛋⽩质结合的位点。
竞争型emsa
探针序列不变，不含修饰基团的探针称为冷探针。冷探针与标记探针竞争性地与蛋⽩结合，冷探针不显影出迁移条带。以冷探针为对照，标记探针出现迁移条带，⽽冷探针迁移条带减弱或消失，则排除了假阳性⼲扰，增加实验结果准确性。
超迁移emsa
使⽤⽬标蛋⽩的特异性抗体，蛋⽩-探针复合物被抗体识别并结合，该三聚复合物在凝胶电泳中，迁移速率再次增⼤，出现在蛋⽩-探针复合物的上⽅的超迁移条带，验证了探针与⽬的蛋⽩的特异性结合。
服务优势
- 直接测定蛋白质与核酸的相互作用，提供定性和定量信息。
- 可用于研究多种类型的相互作用，如特异性结合、非特异性结合、序列特异性等。
- 技术简单，实验操作相对容易。
- 可以使用不同的标记方法和检测技术进行适应不同实验需求。
服务流程
客户提供
需提取核蛋白的细胞＞10^7，动物组织不少于400 mg，植物组织不少于2 g，建议客户在金开瑞表达重组蛋白；
探针序列；
如使用结合蛋白特异性抗体，抗体50 μl以上，浓度大于0.5 mg/ml。
服务说明
特别说明：
▶ emsa亦可⽤于研究rna结合蛋⽩和其相关rna序列的相互作⽤
▶ 如需要做超迁移，需提供ip级别的抗体
▶ emsa与酵⺟单杂交，可共同验证同⼀个问题
| 服务名称 | 服务内容 | 交付内容及标准 | 服务周期(工作日) |
| dna探针标记 | 探针标记及合成 (≤59bp) | 探针退火最少1次 (1组探针退火1次) | 7-10 |
| 探针标记及合成 (60bp-300bp) | 蛋白孵育最少1次 | 12-16 | |
| rna探针标记 | 探针标记及合成 (＜60bp) | 探针标记 | 7-10 |
| emsa | emsa | 10个泳道（包含阴性和阳性对照） | 10 |
案例展示
常见问题与解析 (q&a)
凝胶迁移或电泳迁移率检测（electrophoretic mobility shift assay，emsa）是一种检测蛋白质和dna序列相互结合的技术，可用于定性和定量分析；目前已用于研究rna结合蛋白和特定的rna序列的相互作用，是转录因子研究的经典方法。 金开瑞提供emsa检测技术服务，帮助您检测dna结合蛋白、rna结合蛋白、特定的蛋白质，并可进行未知蛋白的鉴定。
当客户用组织或细胞核蛋白进行实验时，无法确定与探针结合的具体蛋白，需要再提供要研究的抗体，再进行supershift实验。如果抗体能识别与探针结合的蛋白，则会出现一条超迁移条带，即可证明探针与蛋白的结合。需客户提供ip级别的抗体。
使用天然组织细胞样本进行实验，通过抽提核蛋白获取目的蛋白，此为混合蛋白，如要确定某个蛋白结合于探针时，需要加入抗体观察是否形成超迁移条带。可以通过重组蛋白表达系统（如金开瑞的大肠、酵母、哺乳、无细胞等）获得特定的重组蛋白，后续实验中如出现迁移条带，则应源于该蛋白的结合作用。
除了探针序列具有理论预测性、本身属于探索性实验的情况之外，组织细胞中该转录因子丰度较低、只在特定条件阶段表达，特定蛋白同dna结合需要一定的离子或辅助因子条件（如mg2 、zn2 、atp），重组表达蛋白在dna结合活性方面同天然蛋白存在差异，结合力较弱，需要其他蛋白间接作用于dna等情况下，都难以获得迁移条带。此外，当研究的蛋白本身pi较大（如大于8.0），蛋白在native电泳中将难以随同dna一起向阳极泳动，或在电泳最初阶段同dna解离开。
相关资源
1、emsa的实验步骤
▶ 准备蛋白质和核酸：获得目标蛋白质和相应的dna或rna探针。蛋白质可以是纯化的重组蛋白质或细胞提取物。
▶ 准备核酸标记：对dna或rna探针进行标记，常见的标记方式包括放射性标记（例如32p或35s）或非放射性标记（例如荧光标记或生物素标记）。
▶ 反应混合：将标记的核酸探针与蛋白质样品混合，添加反应缓冲液，包括缓冲盐、非特异性竞争物和非特异性dna或rna。
▶ 反应进行：将反应混合物在适当的温度和时间下孵育，以促使蛋白质与核酸结合形成复合物。
▶ 电泳：将反应混合物加载到聚丙烯酰胺凝胶电泳槽中，进行电泳分离。在非变性条件下进行电泳可以保持蛋白质与核酸的结合。
▶ 凝胶固定和成像：电泳结束后，凝胶固定并进行成像，例如通过放射线照射敏感的凝胶后，通过放射自显影或荧光成像检测标记的核酸探针。
▶ 结果分析：分析凝胶图像，观察是否有蛋白质-核酸复合物的形成。蛋白质-核酸结合会导致迁移速度的减慢或带移动位置的改变。
2、emsa的应用
emsa（electrophoretic mobility shift assay）是一种常用的实验技术，用于研究蛋白质与核酸（dna或rna）之间的相互作用。它在许多研究领域中得到广泛应用，包括但不限于以下几个方面：
● 转录因子研究：emsa可用于研究转录因子与dna的结合。通过分析转录因子与特定基因启动子或调控元件的结合能力，可以揭示基因调控网络和转录调控机制。
● rna结合蛋白研究：emsa可用于研究rna结合蛋白（rna-binding proteins，rbps）与rna的相互作用。通过探究rbps与目标rna序列的结合，可以了解rbps在转录后调控、rna稳定性和翻译调控等过程中的功能。
● dna修复和损伤识别：emsa可用于研究dna修复酶和损伤识别蛋白与dna损伤位点的结合。通过分析这些相互作用，可以深入了解dna修复机制和dna损伤应答通路。
● 药物筛选和药物靶点研究：emsa可用于筛选和评估潜在药物分子与特定dna或rna序列的结合能力。通过检测药物与靶点的相互作用，可以评估药物的亲和力和选择性，为药物开发和靶向治疗提供重要信息。
● 基因调控网络研究：emsa可用于研究基因调控网络中的转录因子与调控元件之间的相互作用。通过分析转录因子与特定启动子或增强子序列的结合，可以揭示基因调控网络的结构和功能，以及转录因子在调控基因表达中的作用。
● 疾病相关基因的功能研究：emsa可用于研究与疾病相关的基因的功能调控。通过分析疾病相关基因的启动子、增强子或调控元件与转录因子的结合，可以了解这些基因的调控机制和与疾病相关的功能变化。
3、蛋白质与核酸之间的相互作用有哪些，常用哪些技术去检测？
▶ 蛋白质与核酸之间的相互作用包括转录因子与dna的结合、rna结合蛋白与rna的结合以及其他蛋白质与dna或rna的相互作用等。常用的技术用于检测这些相互作用的方法包括：
▶ 电泳迁移实验（electrophoretic mobility shift assay, emsa）：通过电泳迁移分析蛋白质与dna或rna结合的迁移差异。该方法基于蛋白质与核酸结合后形成复合物的迁移速度不同，可定性分析相互作用的存在与否。
▶ 共沉淀实验（co-precipitation assay）：利用特定的亲和剂或抗体富集与目标蛋白质相互作用的dna或rna分子。该方法可用于定性和定量分析相互作用的强度和特异性。
▶ 免疫共沉淀实验（immunoprecipitation, ip）：利用特定抗体选择性地富集目标蛋白质及其结合的核酸。该方法通过蛋白质-抗体互作用实现蛋白质与核酸的联结，可用于鉴定和定量分析相互作用的蛋白质和核酸分子。
▶ 酵母双杂交（yeast two-hybrid, y2h）：通过利用酵母细胞内的转录激活和检测系统，研究蛋白质与蛋白质之间的相互作用。该方法可用于筛选和鉴定蛋白质-蛋白质相互作用的交互配对。
▶ 表面等离子共振（surface plasmon resonance, spr）：通过监测蛋白质与核酸相互作用引起的光信号变化，实时测量它们的结合动力学和亲和力。该技术可提供定量的结合强度、关联和解离速率等信息。
▶ rna pull down：利用特定的rna分子富集与目标rna结合的蛋白质。该方法可用于鉴定与rna相互作用的蛋白质，从而揭示rna的功能和调控机制。
▶ dna pull down：利用特定的dna序列富集与目标dna结合的蛋白质。该方法可用于研究与dna结合的蛋白质，如转录因子和其他dna结合蛋白质。
