实验原理
本产品是一款高效、快捷的cdna一链合成预混液,包含所有一链cdna合成反应所需组分(genecreate revertase及其反应buffer、rna酶抑制剂、dntps, oligo(dt)20vn和随机引物等),反应中仅需加入rna模板和水。 预混液中的genecreate revertase是基于m-mlv开发的更高效逆转录酶,降低了rnase h活性,提高了热稳定性,反应温度高达55°c,大幅提升了逆转录效率和对复杂模板(大量二级结构或高gc比例)的耐受性,具有更高的特异性。
通过 realtime pcr进行基因表达分析时,cdna 的检测非常重要。但是用过柱纯化式的rna抽提试剂盒纯化的total rna中经常会混入微量的gdna。而当检测目的基因中存在假基因或无法在横跨内含子的位置上设计引物时,混入的gdna会被当作模板扩增,影响准确的定量。
本产品中genecreate dsdnase,可彻底去除rna模板中残留的基因组dna,使定量结果更加准确;同时其具有热敏感性,可在高温条件下快速不可逆地失活。因此仅需一次加样,即可同管进行去除基因dna 污染与逆转录反应。