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案例展示-大肠杆菌表达系统
文章来源：未知
作者：admin
发布时间：2017-04-21 10:52
1、gfp原核表达优化：
gfp蛋白原核表达通常以包涵体形式表达，普通光源下，极难观察到绿色荧光。我公司通过对gfp序列进行突变，并对启动子进行筛选，优化培养条件，控制表达速率，用大肠杆菌表达的gfp蛋白，完全以可溶形式表达，自然光下可见强烈的绿色荧光。
2、复性条件筛选：
采用96孔板阵列组合ph、盐浓度、氧化还原对、分子伴侣、表面活性剂等因素。将变性蛋白加入微孔板进行快速稀释复性，快速初筛几百种复性条件。
下图为gfp包涵体采用上述方法进行复性筛选
3、上清保证型蛋白表达：
客户经过尝试在大肠杆菌de3中表达目的蛋白a，未能获得上清蛋白，金开瑞采用arctic express表达体系，采用低温诱导和分子伴侣共表达方式，历经40个工作日，获得了在上清中表达的目的蛋白，得到客户的认可。
客户经过尝试在大肠杆菌de3中表达目的蛋白b，目的蛋白表达为包涵体，但是客户需要上清表达的蛋白进行后续实验，后经过金开瑞的arctic express表达体系，历经35个工作日，获得了在上清中表达的目的蛋白。
gfp蛋白原核表达通常以包涵体形式表达，普通光源下，极难观察到绿色荧光。我公司通过对gfp序列进行突变，并对启动子进行筛选，优化培养条件，控制表达速率，用大肠杆菌表达的gfp蛋白，完全以可溶形式表达，自然光下可见强烈的绿色荧光。
2、复性条件筛选：
采用96孔板阵列组合ph、盐浓度、氧化还原对、分子伴侣、表面活性剂等因素。将变性蛋白加入微孔板进行快速稀释复性，快速初筛几百种复性条件。
下图为gfp包涵体采用上述方法进行复性筛选
3、上清保证型蛋白表达：
客户经过尝试在大肠杆菌de3中表达目的蛋白a，未能获得上清蛋白，金开瑞采用arctic express表达体系，采用低温诱导和分子伴侣共表达方式，历经40个工作日，获得了在上清中表达的目的蛋白，得到客户的认可。
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