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【直播预告】学一下,从此酵母双杂交实验难逢敌手!
文章来源:genecreate
作者:genecreate
发布时间:2020-10-26 08:57
分子生物学研究,尤其是人类基因组计划的迅速发展,为适应对众多基因或蛋白进行功能研究的发展趋势,已涌现出很多种新技术,酵母双杂交就是其中的一种。那么我们就来简单了解下酵母双杂交系统吧。
酵母双杂交系统是一种鉴定和检测蛋白质相互作用的研究方法,因其具有灵敏性高、功能强大、适用范围广等特点,现已被应用于多个研究领域。
核蛋白酵母双杂交:
核蛋白酵母双杂交技术最初由fields等人在研究酵母转录因子gal4性质时建立,后续经过不断改进已发展成为一种成熟的蛋白-蛋白互作研究工具,具有简便、灵敏、可反映蛋白在活细胞内互作真实情况的特点,被广泛应用于互作蛋白的筛选、蛋白相互作用的鉴定/验证、蛋白互作机理的探究、蛋白连锁图谱绘制等工作。
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膜蛋白酵母双杂交:
dualmembrane技术在传统的酵母双杂交系统的基础上,巧妙地利用分离的泛素系统(split-ubiquitin)进行蛋白质相互作用的筛选;泛素作为降解信号分子,人为分成两部分:n端(nub),c端(cub),互补重构的完整泛素分子可被泛素专一性蛋白酶(ubps)识别,从而导致与泛素相连的蛋白被酶解。
dualmembrane技术在传统的酵母双杂交系统的基础上,巧妙地利用分离的泛素系统(split-ubiquitin)进行蛋白质相互作用的筛选;泛素作为降解信号分子,人为分成两部分:n端(nub),c端(cub),互补重构的完整泛素分子可被泛素专一性蛋白酶(ubps)识别,从而导致与泛素相连的蛋白被酶解。
![](/uploads/image/ua201026/3-2010260u321255.png)
酵母双杂交技术的应用
植物:自交不亲和机理研究……
病毒:朊蛋白、病毒蛋白相互作用蛋白筛选……
信号通路:转录因子、雌激素α受体相互作用蛋白筛选……
癌症医学:癌症相关蛋白、凋亡相关蛋白相互作用蛋白筛选……
寄生虫医学:毒力因子致病机制研究、半乳糖凝集素互作蛋白筛选……
基础原理研究:肌球蛋白、蛋白酶体调节因子相互作用蛋白筛选、受精卵发育……
酵母杂交优势
(1)真实环境
它是一种真核细胞内的反应,相对于众多的体外实验和细菌来说,更加贴近于真实。
(2)高度灵敏
(2)高度灵敏
酵母双杂交系统可以检测到十分微弱和短暂的蛋白相互作用。
(3)海量筛选
从cdna文库中筛选与目的蛋白相互作用的新蛋白,在蛋白功能未知或已知的条件下,采用不同来源的cdna文库作为prey 筛选,可以发现新的基因,提供新的线索。
a、核蛋白酵母双杂交
b、split-ubiquitin膜蛋白酵母双杂交
c、cdna质粒文库构建服务
(4)利用酵母双杂交建立基因组蛋白连锁图
众多的蛋白质之间在许多重要的生命活动中都是彼此协调和控制的,基因组中的编码蛋白质的基因之间存在着功能上的联系。
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