哺乳动物表达载体的元件和功能-凯发k8网页登录
哺乳动物表达载体通常包含多个重要元件,每个元件都具有特定的功能,以实现高效的基因表达。以下是常见的哺乳动物表达载体元件及其功能:
起始子(promoter):起始子是控制基因转录起始的序列区域,它可以驱动目标基因的转录。常用的起始子包括强启动子,如cmv(犬细小病毒早期促进子)、sv40(模拟病毒40大t抗原早期启动子)、ef1α(人骨髓中源性溶血性贫血病病毒增强子1α启动子)等。选择合适的起始子可以实现高水平的目标基因表达。
终止子(terminator):终止子是控制基因转录终止的序列区域,它能够保证转录过程的正常终止,并增加mrna稳定性。常用的终止子包括bgh终止子(牛生长激素多聚腺苷酸转录终止子)和sv40终止子等。
选择性标记基因(selectable marker):选择性标记基因是用来筛选转染成功的细胞的基因。常用的选择性标记基因包括抗生素抗性基因,如氨苄青霉素抗性基因(ampicillin resistance gene)或新霉素抗性基因(neomycin resistance gene),以及荧光蛋白基因(例如绿色荧光蛋白-gfp),方便对转染细胞进行鉴定和筛选。
多克隆位点(multiple cloning site,mcs):多克隆位点是用来插入目标基因的区域,通常包含多个限制性内切酶切位点,方便在载体上进行基因插入、删除或替换。
转录增强子(enhancer):转录增强子是调节基因转录水平的序列区域,它可以增强起始子的活性,提高目标基因的表达水平。常用的转录增强子有cmv增强子和sv40增强子等。
信号肽(signal peptide):信号肽是指一段编码蛋白质定位和分泌的信号序列,能够帮助目标蛋白在细胞内正确折叠和定位,并在细胞外分泌或定位到细胞膜上。常用的信号肽包括经典的信号肽序列,如igκ信号肽序列、胰岛素信号肽序列等。
poly(a) 尾(polyadenylation signal):poly(a) 尾序列位于目标基因的3'末端,它可以帮助mrna转录过程的正常终止,并增加其稳定性。常用的poly(a) 尾序列包括胰岛素启动子多聚腺苷酸尾巴(insulin polyadenylation signal)和sv40多聚腺苷酸尾巴等。
这些元件在哺乳动物表达载体中具有特定的功能,可以实现高效的基因表达、正确的定位和转录调控。根据研究目的和需求,可以选择合适的载体构建表达系统。
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