为什么重组大肠杆菌发酵生产重组蛋白纯度低?-凯发k8网页登录

信息来源:金开瑞 作者:genecreate 发布时间:2023-08-30 17:25:00

    重组大肠杆菌发酵是一种常见的生产重组蛋白的方法,但确实存在纯度低的问题。以下是可能导致重组蛋白纯度低的几个常见原因和相应的解决方法:

    1、溶解和折叠问题:重组蛋白在大肠杆菌中表达后,可能存在溶解和折叠问题,导致其不能正确地形成功能性结构。这可能由于蛋白质本身的特性、表达条件或质量控制机制等因素引起。

解决方法:

    优化表达条件:包括温度、培养基成分、诱导条件等。

    添加辅助折叠蛋白:如分子伴侣蛋白,可以帮助目标蛋白正确折叠。

    使用转化子工程:通过改变蛋白质序列,如引入亲水性氨基酸或剪切位点等,改善溶解和折叠问题。


 

    2、存在杂质:重组大肠杆菌中可能存在其他细胞蛋白、内毒素等杂质,这些杂质会降低重组蛋白的纯度。

解决方法:

    细胞破碎和裂解:使用适当的细胞破碎方法,如超声波、高压均质等,彻底破碎细胞壁释放目标蛋白。

    蛋白纯化:采用蛋白质层析技术,如亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析等,根据目标蛋白的特性选择适当的方法进行纯化。


    3、重组蛋白降解:大肠杆菌中存在多种蛋白酶和脱氨酶等降解酶,可能会降解重组蛋白。

解决方法

    添加蛋白酶抑制剂:在细胞破碎和纯化过程中添加适当的蛋白酶抑制剂,如pmsf等,以防止重组蛋白被降解。

    优化表达策略:调整诱导时间和条件,以最大限度地减少重组蛋白在发酵过程中的降解。

    此外,对于特定的重组蛋白,还需要考虑其本身的特性和结构,以确定适当的生产和纯化策略。定量检测重组蛋白的纯度也是非常重要的,可以使用sds-page、western blot等方法进行分析。

    最终,优化工艺和条件、合理选择表达宿主、合理设计融合蛋白或标签等措施都有助于提高重组蛋白的纯度。

 




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