酵母yihgold菌株感受态制备方法-凯发k8网页登录
信息来源:金开瑞 作者:genecreate 发布时间:2023-08-11 16:44:39
酵母双杂交(y2h)实验中常用的酵母菌株之一是yihgold菌株。为了制备yihgold菌株的感受态,以下是一种常见的制备方法:
从冰冻细胞库中取出yihgold菌株,将其转移到一块含有蔗糖的ypd(yeast extract/peptone/dextrose)平板上。在室温下孵育24-48小时,直到出现单个克隆的菌落。
从ypd平板上挑选一个单克隆菌落,接种到10 ml的ypd液体培养基中,室温下摇床培养过夜。
第二天,将过夜培养的yihgold菌株离心收集细胞。将菌体重悬于10 ml的无菌蒸馏水中,并再次离心。
弃去上清,用1 ml的无菌蒸馏水重新悬浮菌体,并将其转移至2 ml离心管中。
菌体在离心管中用洗涤液(如sds)或锡硫酸铵(tes)进行洗涤。加入适量的洗涤液,并轻轻混匀,然后离心收集菌体。
弃去洗涤液,用1 ml的无菌蒸馏水再次悬浮菌体,并将其转移至2 ml离心管中。
重复步骤5和6两次,以确保彻底洗涤掉洗涤液或锡硫酸铵。
最后一次弃去洗涤液,悬浮菌体于适量的无菌蒸馏水中,使细胞浓度稀释到所需的感受态浓度。
将制备好的感受态yihgold菌株用冰冻保存方法保存。常见的方法是将菌体悬浮于甘油缓冲液中,然后分装到无菌冻存管中并存储在 -80°c 冷冻箱中。
在制备感受态yihgold菌株的过程中,要保持无菌操作,并避免外源dna的污染。此外,根据具体实验需求和y2h系统的要求,有时可能需要对菌株进行进一步的处理和测试,比如检测报告基因活性、验证阳性对照等。
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