酵母yihgold菌株感受态制备方法-凯发k8网页登录

    酵母双杂交（y2h）实验中常用的酵母菌株之一是yihgold菌株。为了制备yihgold菌株的感受态，以下是一种常见的制备方法：

    从冰冻细胞库中取出yihgold菌株，将其转移到一块含有蔗糖的ypd（yeast extract/peptone/dextrose）平板上。在室温下孵育24-48小时，直到出现单个克隆的菌落。

    从ypd平板上挑选一个单克隆菌落，接种到10 ml的ypd液体培养基中，室温下摇床培养过夜。

    第二天，将过夜培养的yihgold菌株离心收集细胞。将菌体重悬于10 ml的无菌蒸馏水中，并再次离心。

    弃去上清，用1 ml的无菌蒸馏水重新悬浮菌体，并将其转移至2 ml离心管中。

    菌体在离心管中用洗涤液（如sds）或锡硫酸铵（tes）进行洗涤。加入适量的洗涤液，并轻轻混匀，然后离心收集菌体。

    弃去洗涤液，用1 ml的无菌蒸馏水再次悬浮菌体，并将其转移至2 ml离心管中。

    重复步骤5和6两次，以确保彻底洗涤掉洗涤液或锡硫酸铵。

    最后一次弃去洗涤液，悬浮菌体于适量的无菌蒸馏水中，使细胞浓度稀释到所需的感受态浓度。

    将制备好的感受态yihgold菌株用冰冻保存方法保存。常见的方法是将菌体悬浮于甘油缓冲液中，然后分装到无菌冻存管中并存储在 -80°c 冷冻箱中。

    在制备感受态yihgold菌株的过程中，要保持无菌操作，并避免外源dna的污染。此外，根据具体实验需求和y2h系统的要求，有时可能需要对菌株进行进一步的处理和测试，比如检测报告基因活性、验证阳性对照等。