双特异性抗体的制备流程-凯发k8网页登录
信息来源:金开瑞 作者:genecreate 发布时间:2023-08-09 16:30:13
双特异性抗体是一种具有两个不同的抗原结合位点的抗体分子,可以同时结合并识别两个不同的抗原。以下是一种常见的制备双特异性抗体的流程:
设计:确定目标抗原和需要结合的两个抗原,并设计双特异性抗体的结构。可以采用多种策略,如二链抗体、三链抗体、单链抗体等。
基因工程:进行基因工程,将编码两个单克隆抗体的基因重组成一个单一的基因,使其能够同时表达两个单克隆抗体的抗原结合区域。这些基因工程步骤包括pcr扩增、连接、插入到表达载体中等。
转染与表达:将经过基因工程的dna导入到合适的细胞系统中,如cho细胞、hek293细胞等,通过转染技术实现基因的表达。
筛选:利用特定的筛选方法,如细胞表面抗原捕获、酶联免疫吸附试验(elisa)、流式细胞术等技术,筛选出能够同时结合两个不同抗原的双特异性抗体。
增强表达:通过优化培养条件、细胞系的选择、基因工程等手段,提高双特异性抗体的表达水平和稳定性。
纯化与验证:使用适当的纯化方法,如亲和层析、凝胶过滤层析、离子交换层析等,纯化双特异性抗体。然后,对其进行验证,如sds-page凝胶电泳分析、western blot、生物活性检测等。
进一步改良:根据需要,可以通过其他的工程方法对双特异性抗体进行改良,如引入fc区域、修饰抗体的结构等,以提高其稳定性和功能。
制备双特异性抗体的具体流程可能会因研究目的、抗原的特性和研究者的实验条件而有所不同。上述流程仅提供了一种常见的制备流程作为参考。在实际操作中,需要根据具体情况进行优化和调整。
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