酵母文库筛选原理-凯发k8网页登录
酵母文库筛选是一种常用的方法,用于从酵母细胞中筛选出与特定蛋白质相互作用的蛋白质或dna序列。其主要原理如下:
酵母双杂交(y2h)原理:
在酵母细胞中,使用两个部分的蛋白质构建一个可激活转录的转录因子。这两个部分是:靶蛋白的dna结合域与活化域;以及一个酵母融合库中的蛋白质(假设是潜在的互作伴侣)的靶蛋白结合域(例如目标蛋白的激活域)。
如果目标蛋白与酵母融合库中的蛋白质相互作用,则两个融合蛋白质结合并形成一个激活复合物,从而激活转录因子。
激活的转录因子会促使报告基因的表达,例如lacz(编码β-半乳糖苷酶)或ade2(参与腺嘌呤合成)等。
酵母三杂交(y3h)原理:
酵母三杂交是在酵母双杂交技术的基础上发展而来的。它通过引入第三个蛋白质组件来进一步确认蛋白质相互作用。
第三个蛋白质组件通常是一个“桥连蛋白”,其结合于两个潜在互作伴侣蛋白质之间,并起到连接的作用。
只有当两个潜在互作伴侣以及桥连蛋白同时存在时,转录因子才能被激活,进而触发报告基因的表达。
遗传选择筛选原理:
在酵母细胞中,通过引入外源基因或表达库(例如cdna文库)来筛选与特定蛋白质相互作用的复合物。
使用特定的选择条件,例如生长介质中缺乏某种必需物质(如氨基酸)等,以筛选出与目标蛋白相互作用的酵母细胞。
在筛选过程中,只有具有目标蛋白与潜在互作伴侣的酵母细胞能够存活和生长。
酵母文库筛选通过检测蛋白质相互作用,提供了一种高通量的方法,可用于研究蛋白质相互作用网络、功能注释和信号通路等生物学问题。
酵母文库筛选法具有一定的局限性,例如由于实验条件的限制,可能会出现假阳性或假阴性结果,因此在进行结果验证和进一步研究时需要谨慎分析和解释。
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