打质谱找互作蛋白操作步骤-凯发k8网页登录
信息来源:金开瑞 作者:genecreate 发布时间:2023-08-03 14:32:55
打质谱(mass spectrometry)是一种用于鉴定蛋白质样本中的互作蛋白质的方法。以下是打质谱找互作蛋白的一般操作步骤:
1、样品制备:准备待测试的蛋白质样品。可以从细胞裂解物、组织提取物或免疫沉淀等方法获取样品。
2、sds-page分离:将待测样品通过sds-page电泳进行蛋白质分离。可以根据需求选择单维或双维电泳分离。
3、凝胶染色:使用染色剂(如coomassie蓝染色剂)对蛋白质在凝胶上的分离带进行染色,以可视化蛋白质。
4、切割凝胶:使用刀片或其他工具,在凝胶上特定位置切割出待鉴定蛋白质的分离带。
5、蛋白质胶块处理:将切割下来的蛋白质胶块放入离子切割器或超声波清洗器中,去除染色剂和其他杂质。
6 、消化:将蛋白质胶块进行蛋白酶消化,以将蛋白质分解成肽段。常用的消化酶包括胰蛋白酶和胃蛋白酶。
7、肽段提取:用合适的有机溶剂(如乙酸乙酯)提取消化后的肽段,并将其转移到质谱分析所需的溶液中。
8 、质谱分析:使用质谱仪对提取到的肽段进行分析。常见的质谱技术包括液相色谱-质谱联用(lc-ms/ms)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(maldi-tof ms)等。
9、数据分析:通过与数据库比对、蛋白鉴定算法及统计分析等手段,识别和鉴定肽段及其源蛋白质。
10 、互作蛋白鉴定:根据质谱数据鉴定样品中与待测蛋白质相互作用的其他蛋白质。
在进行打质谱实验前,应详细阅读相关文献和参考实验室的操作指南,以确保实验成功并获得可靠的结果。
上一条:双荧光素酶报告基因实验步骤
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