fish实验的步骤及原理-凯发k8网页登录
信息来源:金开瑞 作者:genecreate 发布时间:2023-07-25 17:18:17
fish是常用的细胞遗传学技术,用于检测和定位dna或rna序列在细胞核中的位置。下面是fish实验的基本步骤及原理:
样品制备:
处理细胞:收集目标细胞样品,如固定的组织切片或悬浮细胞。
固定:使用适当的固定剂将细胞固定在载玻片或载玻片上。
透化:通过使用适当的方法,使细胞膜通透性增加,以便探针分子可以进入细胞内。
探针制备:
目标序列选择:确定要检测的目标dna或rna序列。
靶向序列合成:根据目标序列设计引物,合成与目标序列互补的荧光标记化的探针。
杂交反应:
探针混合:将目标序列的探针与杂交缓冲液混合。
杂交:将探针混合物加到固定的细胞样品上,并在特定温度下进行杂交反应。探针会与细胞中的目标序列杂交结合。
洗涤:
用高盐浓度洗涤缓冲液洗去非特异性结合的探针,以减少背景噪音。
染色:
荧光染色:将荧光标记的抗体或亮染料添加到载玻片上,与目标序列上的探针结合。这样可以形成荧光信号。
显微镜观察:
在荧光显微镜下观察载玻片上的染色细胞,通过荧光信号确定目标dna或rna序列的位置和数量。
fish的原理是基于目标探针与目标序列的互补碱基配对原则。荧光标记的探针可以与细胞中的目标dna或rna序列的互补部分结合形成稳定的双链结构。通过荧光信号的检测,可以确定目标序列在细胞核中的位置和数量。
fish技术可应用于多个领域,如遗传学研究、肿瘤学、胚胎学等,用于检测基因缺失、基因扩增、染色体异常等变化。
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