rna蛋白免疫沉淀的原理(rip实验)-凯发k8网页登录
信息来源:金开瑞 作者:genecreate 发布时间:2023-07-18 16:11:57
rna蛋白免疫沉淀(rna-protein immunoprecipitation,简称rip)是常用的实验技术,用于研究rna与特定蛋白之间的相互作用。其原理基于抗体的特异性结合,使目标rna与与之相互作用的蛋白结合,并随后通过免疫沉淀分离出这些rna蛋白复合物。
以下是rip实验的一般步骤和原理:
交联:将细胞或组织中的rna与与之相互作用的蛋白交联在一起,通过化学交联剂(如甲醛)或者紫外线辐射进行交联。
细胞裂解:将交联的细胞或组织样品裂解开,释放出细胞内的rna蛋白复合物。
免疫沉淀:将目标蛋白的特异性抗体加入至裂解液中,利用抗体与蛋白的特异性结合,将目标蛋白及其相关的rna结合成复合物。
洗涤:通过多次洗涤步骤,去除非特异性结合的蛋白和rna。
分离:将rna蛋白复合物从剩余的细胞裂解产物中分离出来,通常采用磁珠等辅助材料。
去交联:将rna蛋白复合物去除交联,通过加热或酶消化等方法解除rna与蛋白间的共价键。
rna提取:从复合物中提取rna,以供后续实验分析,如逆转录聚合酶链反应(rt-pcr)或高通量测序等。
通过rip实验,可以确定特定蛋白与rna之间的相互作用,并进一步了解这些作用在细胞中的功能和调控机制。
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