ripqpcr实验步骤-凯发k8网页登录

    rip-qpcr（rna免疫共沉淀联合定量pcr）是一种常用的实验技术，用于检测特定rna与与之相互作用的蛋白质的沉淀水平。以下是rip-qpcr实验的一般步骤：

    细胞准备：收集目标细胞或组织，并进行合适的细胞裂解以获得总细胞裂解物（total cell lysate）。注意，在该步骤中应添加rnase抑制剂以保护rna的完整性。

    抗体结合：将特异性抗体添加到总细胞裂解物中，并进行免疫反应使抗体与目标蛋白质结合。

    免疫共沉淀：加入蛋白a/g磁珠或类似的亲和树脂，使其与抗体-目标蛋白质复合物结合。通过磁力来沉淀下复合物，并去除非特异性蛋白质。

    洗涤：使用适当的洗涤缓冲液多次洗涤磁珠，以去除非特异性结合的蛋白质和其他污染物。

    rna提取：使用适当的方法（例如酚/氯仿萃取法）从沉淀的复合物中提取rna。注意，在提取过程中应添加rnase抑制剂以保护rna。

    反转录：使用逆转录酶（rt）将提取的rna转录为cdna，其中包含与之相互作用的rna。

   定量pcr分析：使用荧光定量pcr（qpcr）或实时定量pcr等技术，使用特异性引物和探针对cdna进行扩增和检测。根据所选引物和探针的特异性，可以定量检测与目标rna相互作用的蛋白质的沉淀水平。

    每个实验室可能会有一些操作上的细微差异和优化步骤，具体的步骤和条件可以根据实验目的和研究需求进行调整和优化。