rna pulldown实验原理及步骤-凯发k8网页登录
信息来源:金开瑞 作者:genecreate 发布时间:2023-07-10 16:44:51
rna pulldown(rna亲和富集)是一种常用的实验技术,用于研究rna与蛋白质的相互作用或找到与目标rna相互作用的结合蛋白。以下是rna pulldown实验的一般原理及步骤:
rna探针设计:根据目标rna序列设计合适长度的dna或rna探针,这些探针具有与目标rna特异性互补序列。
rna探针标记:将rna探针标记上生物素或其他适当的标记物。通常使用生物素标记rna探针便于后续的亲和富集。
细胞裂解:将待检测的细胞或组织收集,并用合适的裂解缓冲液进行细胞裂解,获得总细胞裂解物(total cell lysate)。
rna蛋白复合物形成:将细胞裂解物与标记的rna探针一起孵育,使rna探针与特定的rna结合蛋白形成复合物。
亲和富集:加入具有亲和活性的固相材料(如亲和树脂或磁珠),其表面与探针上的生物素或其他标记物具有亲和性。复合物通过亲和作用结合到固相材料上。
洗涤:通过多次洗涤去除非特异性结合的蛋白质。
蛋白质分离与分析:将沉淀的蛋白质经sds-page凝胶电泳进行分离。然后,使用免疫印迹(western blotting)等方法对感兴趣的蛋白质进行检测。
rna pulldown实验可以用于鉴定与目标rna相互作用的结合蛋白,帮助研究rna的功能和相关生物过程。这种方法广泛应用于rna结合蛋白的研究以及rna转运、转录调控、翻译调控等领域的探索。
下一条:ripqpcr实验步骤
- 扫码登入
- 账户密码登入
- 短信验证登入
须知
首次微信扫码用户步骤:
1.微信扫码。
2.本页面完善手机验证。
找回密码
已有账号?
注册帐号
已有账号?
-
扫码领资料
扫码领资料
电话:027-87960366
qq:3013422302
-
文献奖励申请