重链抗体细菌表达 -凯发k8网页登录

    重链抗体是一种特殊类型的抗体，其通过单链抗体（scfv）产生，包含一个重链和一个轻链可变片段。与传统抗体不同的是，重链抗体只包含一个完整的抗原结合区域，而不含有fc部分。

    相较于传统抗体，重链抗体具有较小的大小，更好地渗透性和更高的稳定性，因此在药物研发中被广泛应用。重链抗体的表达通常采用细菌表达系统，下面将详细介绍在细菌表达系统中重链抗体的表达过程。

1、选择宿主菌

    在重链抗体的表达中，e.coli是最常用的宿主菌之一，因为其具有易于生长、遗传学和生化学方面的研究工具，并且处理大量重组蛋白质也非常方便。通常情况下，选择bl21（de3）或blr等strain作为表达宿主菌。

2、构建表达质粒

    在表达系统中，需要构建表达载体来实现重链抗体的表达。基本的表达质粒包括启动子、选择标记、多克隆位点和终止子等元素。

    启动子是控制转录的dna序列，选择标记用于筛选正常重链抗体表达菌株，多克隆位点用于插入目标dna序列并检测表达蛋白，终止子指定rna链的终止位置和释放转录产物的dna序列。

3、转化细胞

    将构建好的表达质粒转化到宿主菌中。一般采用化学方法（如cacl2法）或电穿孔法（如电转化法）将dna转化为细胞中。转染后可通过筛选培养基，比如含有抗性筛选剂的lb平板，来挑选正常的克隆。

4、诱导表达

    在得到正常的表达菌之后，应该加入适当的感受态诱导剂来实现重链抗体的表达。iptg是最常用的诱导剂之一，其作用是使宿主菌内的t7 rna聚合酶被激活，从而促进外源基因的转录和翻译。

5、培养和收获

    在添加感受态诱导剂之后，应该采用适当条件下的培养方法来获得重链抗体。通常情况下，重链抗体表达的最佳培养条件为37℃下的250rpm振荡培养。表达菌的质量、时间和温度等因素对表达效果有着重要的影响。

    在培养结束后，菌液应该进行离心分离得到细胞沉淀。之后采取适当方法，如冰乙酸法或超声波法，对细胞沉淀进行裂解，并收集表达重链抗体的上清液。

6、纯化

    纯化是确保重链抗体高效性和活性的关键环节。通常可以采用亲和层析法、离子交换层析法或分子筛层析法等方法进行纯化。

    在细菌表达中，构建表达载体、转化细胞、诱导表达，培养和收获以及纯化都是必不可少的步骤。每一步的优化都能带来重链抗体表达效率和纯度的提高。