一分钟掌握pkh26染色实验:点亮细胞研究的神秘之旅 -凯发k8网页登录
pkh26是一种脂溶性的荧光染料,能与细胞膜的脂质分子稳定地结合,从而标记活细胞的膜结构。在细胞分裂时,pkh26荧光会平均分配到两个子代细胞中,因此荧光强度会随着分裂次数而递减。pkh26标记的细胞具有高稳定性和低毒性,适用于体外和体内长期示踪实验。
应用方向
pkh26染色可用于多种细胞生物学研究,主要有以下几个方面:
细胞增殖分析:通过测量细胞的荧光强度和分布,可以估算细胞的增殖代次、增殖速率、增殖周期等参数。这种方法可以用于检测不同条件下细胞的增殖能力,如抗原刺激、药物干预、基因修饰等。也可以用于识别不同增殖能力的细胞亚群,如干细胞、祖细胞、癌细胞等。
细胞迁移分化跟踪:通过将标记的细胞移植到体内或体外的目标组织中,可以观察细胞在活体组织中的迁移轨迹和分化状态。这种方法可以用于研究干细胞治疗、组织再生、肿瘤转移等过程。
细胞间相互作用检测:通过观察不同荧光标记的细胞之间的接触、融合、转移等现象,可以研究细胞间的信号传递、功能协调、物质交换等机制。这种方法可以用于研究免疫反应、血小板功能、病毒感染、纳米颗粒摄取等过程。
实验流程及注意事项:
pkh26染色包含pkh26试剂溶解和稀释、细胞悬液制备和染色、染色后细胞洗涤和重悬、荧光检测和分析等实验步骤,具体流程如下:
pkh26试剂溶解和稀释
从冰箱中取出pkh26试剂,静置几分钟至室温,或者37℃水浴片刻后,离心盛放pkh26的管子,开盖前请务必离心几分钟让试剂充分落入管底后才能开盖。(注意:pkh26试剂为dmso溶液,在低温时会凝固,需要加热融解后使用。)
根据需要检测的细胞样品数,用合适的溶液(如:无血清培养基,hbss或pbs)将pkh26母液250-500倍稀释,配制成染色工作液。(注意:最佳的工作液浓度请根据不同细胞和自身的实验体系来调整;pkh26易被水解,在水溶液中会很快变质,所以工作液要现配现用,不能提前配。)
细胞悬液制备和染色
将制备好的待测细胞用100-200μl染色工作液重悬,至细胞浓度大约1×107cells/ml。注意:对于贴壁细胞,可直接就贴壁状态的细胞进行荧光标记,进行原位染色;染色液足够覆盖细胞即可。
将染色液和细胞在37℃培养箱中孵育5-15分钟。(注意:孵育时间根据细胞种类和染色效果而定。)
在2-8℃培养箱中孵育15-30分钟。(注意:这一步是为了让染料与脂质分子形成稳定的结合。)
染色后细胞洗涤和重悬
离心后去上清,收集细胞,用pbs洗涤细胞1-2次,最后加入含10%胎牛血清的dmem培养基重悬细胞。(注意:洗涤是为了去除未结合的染料,减少荧光背景。)
根据自己实验需要处理细胞。(注意:标记后的细胞可以用于细胞增殖、迁移、分化等研究,也可以用于体外和体内的示踪实验。)
荧光检测和分析
取500μl细胞悬液,用流式细胞仪检测。荧光波长:λex=551nm,λem=567nm。注意:流式细胞仪可以检测细胞的荧光强度和分布,以及细胞增殖代次等参数。
随后还可按照细胞的正常培养方法进行培养。(注意:标记后的细胞也可以在荧光显微镜下直接观察标记效果。)
金开瑞提供pkh26染色服务,并提供细胞增殖、细胞迁移及侵袭等细胞学功能实验,详情请咨询
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