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  • q:prm技术是什么?与蛋白质组学中常用的“鸟枪法”是什么关系?

    prm全称parallel reaction monitoring,即平行反应监测,还有另外一个叫法mrmhr。prm是目前靶向蛋白质组学策略中最常用的蛋白定量技术之一。prm技术是基于高分辨率质谱发展起来的,通常在q-tof或者q-orbitrap类型的质谱仪上实现。其基本原理是:四级杆(q)首先选出的目标肽段离子,进入碰撞室中打碎后,所有的碎片离子经过质量分析器产生一张高分辨的二级质谱图,通过提取其中的碎片离子信息即可实现目标肽段的定量。“鸟枪法”(shot-gun)与prm是两种不同的质谱扫描方式。“鸟枪法”是一种大规模的扫描方式,目标是尽可能多的检测样品中的蛋白,通常有偏向易于检测到丰度较高蛋白的特点,而prm则是针对特定感兴趣蛋白的扫描方式,目标是实现目标蛋白的精准定量。

  • q:目标蛋白定量可以用wb来做,为什么要选prm?

    对目标蛋白的定量确实两种方法都可以实现,有意思的是prm也常被称为“质谱领域的wb”。wb是依赖于抗体的检测方法,其效果与抗体的质量、实验操作密切相关,而且严格说来,其基于显色条带亮度的定量只能说是“半定量”。目前市场上抗体质量参差不齐,很多蛋白又没有商品化抗体可以购买,制备单抗周期又长,这些因素很大程度上限制了wb的效果。

    prm则是一种不依赖抗体,基于质谱的靶向定量技术,所以对一些没有抗体的蛋白,以及针对翻译后修饰的蛋白,通过prm可以很快拿到定量结果。prm灵敏度高,特异性好,定量范围可达4个数量级以上,实现了真正意义上的蛋白精确定量。另外,通量方面,一次prm实验可同时对多达几十个蛋白进行同时定量,这也是wb很难达到的。

  • q:prm分析流程是怎样的?

    要做prm首先要明确目标蛋白(或多肽)是什么,设计和建立针对这些目标蛋白prm质谱采集方法,然后对待测样品进行prm数据采集,将得到的原始谱图数据导入分析软件提取子离子信息进行定量。另外,如果配制已知浓度的标准肽段,用prm额外做一个标准曲线,即可实现绝对定量。

  • q:prm技术能应用到哪些方面?

    研究工作中涉及到蛋白或多肽定量的都可以通过prm技术来实现。具体说来,比如验证定量蛋白质组学中某些蛋白的变化,多肽的相对和绝对定量,想做蛋白定量却没有抗体,针对蛋白修饰位点的定量,想同时定量多个蛋白的情况等,都可以用prm来做。

  • q:关于prm技术,可否推荐一些较经典的参考文献?

    1.the scheduled mrm algorithm enables intelligent use of retention time during multiple reaction monitoring -delivering up to 4000 mrm transitions per lc run. ab sciex technical note 0921010-03.

    2.ruedi aebersold, alma l.burlingame and ralph a. bradshaw.western blots versus selected reaction monitoring assays:time to turn the table. molecular & cellular proteomics.september1, 2013, 12 :2381-2382.

    3.quantitative profiling of protein tyrosine kinases in human cancer cell lines by multiplexed parallel reaction monitoring assays. molecular & cellular proteomics, 2015,14(12):218-24.

    4.targeted proteomics analysis of protein degradation in plant signaling on an ltq-orbitrap mass spectrometer. journal of proteome research 13, 4246 (2014).

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