染色质免疫共沉淀技术步骤-凯发k8网页登录
信息来源:金开瑞 作者:genecreate 发布时间:2023-07-03 16:37:33
染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,简称chip)技术是一种用于研究蛋白质与染色质相互作用的方法。以下是染色质免疫共沉淀技术的一般步骤:
细胞/组织交联:处理样本前需将细胞或组织进行交联,以稳定蛋白质与dna之间的相互作用。可以使用甲醛等交联剂进行固定。
组织/细胞裂解:将交联后的细胞或组织裂解,释放出染色质。常用的裂解方法包括机械裂解、化学裂解或超声波裂解。
dna剪切:使用限制性内切酶或超声波等方法,将染色质剪切成适当长度的片段。得到的片段一般在200-1000碱基对之间。
免疫共沉淀:将抗体加入样品中,与特定的蛋白质结合。抗体所结合的蛋白质-dna复合物会与抗体形成免疫复合物。
洗涤:通过一系列洗涤步骤,去除非特异性结合的物质,以减少背景噪音。
解交联:将样品进行热处理或者酶解,去除交联剂,并将dna释放。
dna纯化:通过吸附柱、酚/氯仿提取等方法从溶液中纯化出免疫共沉淀的dna。
dna分析:纯化后的dna可以进一步进行pcr扩增、实时定量pcr、测序等分析,以确定蛋白质与染色质相互作用的靶点。
每个实验室可能会根据具体需求对步骤进行一些调整和优化。此外,染色质免疫共沉淀技术的成功还受到多个因素的影响,包括抗体的选择和特异性、交联条件的优化等。
在进行染色质免疫共沉淀实验时,请遵循实验室安全规范,并参考相关文献和专业指导。
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